猪肉中克伦特罗检测

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猪肉中克伦特罗的检测1篇

【篇1】猪肉中克伦特罗的检测

科技信息职教与成教

盐酸克伦特骂硇楦测方法

河南科技大学林业职业学院刘荣森

[摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱

法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳"~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向.

[关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展

中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥

用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称:

Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯

苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式:

]}H31.

l

盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减

少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该

药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦

特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉

精已成为重大的食品安全问题.

中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情

况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒

事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在

检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速,

方便,精确的检测方法.

检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高

效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法

(CE)等.

1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS)

气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法

fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在

情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳

性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲

基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间

长,需贵重仪器等缺点.

吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱

克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化

条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经

SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨

(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸

克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～

88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗

的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓

缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯

洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行

测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦

特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性

相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—

tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦

特罗含量,最低检测限为2n.

2.高效液相色谱法(HPLC)

高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合

大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确

证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是

检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与

GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵

重仪器,难于操作,价格昂贵.

吴庆洁等用高效液相色谱法同时测定畜禽组织中盐酸克伦特罗

和4种抗生素(土霉素,四环素,金霉素,氯霉素).用50%的三氯乙酸沉

淀蛋白质,通过固相萃取(sPE)小柱进行活化,进行高效液相色谱分析.

本法对盐酸克伦特罗的最低检出量为1.25ng.盐酸克伦特罗的回收率

85.4%～93.8%.顾国平等用5%HClO超声提取肉样中的盐酸克伦特

罗,80%水浴沉淀杂质,然后用固相萃取柱预分离和富集,用高效液相

色谱法进行测定,以SunfireCl84.6mX150mm,3.9txm分离柱为固定相,

用紫外二极管阵列检测器检测,外标法定量;在该色谱条件下盐酸克伦

特罗在6.3rain左右可达到基线分离.方法的回收率在81.6%～103.7%.

相对标准偏差在4.76%～7.94%.刘志梅等选用7cm的聚丙烯中空纤

维,在样品溶液pH=l1,室温条件下萃取20min后,将有机溶剂在氮气

流下吹干,用151xL甲醇溶解,进行液相色谱分析.结果表明:在优化的

试验条件下,克伦特罗的富集倍数为78倍,线性范围在30～60001~g/kg

之间,线性相关系数O.9995,检出限2.4l~g/kg.将该方法用于猪肉组织

中克伦特罗的测定,低,中,高3种浓度的加标回收率分别为84.9%,

91.4%和95.0%,相对标准偏差(RSD)分别为6.3%,5.8%和4.6%.该方法

操作简便,环境友好,具有较高的灵敏度,适于猪肉中盐酸克伦特罗残

留的检测.

高效液相色谱法也经常和质谱联用,实现分析过程的自动化.毛丽

莎等171通过液相色谱一质谱以MRM方式检测,同时测定了猪肉组织中

沙丁胺醇,莱克多巴胺和克伦特罗.样品用5%高氯酸溶液振荡提取,反

相c18小柱净化浓缩,,以D3一沙丁胺醇为内标定量.测定克伦特罗的

线性范围均为0.1～10.Oe~L,线性相关系数0.9992,定量检出限为

0.5~g/kg,回收率为88-4%～96.2%.该方法简便,灵敏度好,选择性好.

3.酶标记免疫吸附测定法(ELISA)

ELBA法是检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析法,测定的基础

是免疫学抗原抗体特异性结合反应和高效的酶促反应.ELISA法检测

限可达0.05r-gs,实际应用中常使用EHSA试剂盒.该方法具有样品不

需前处理或前处理简单,一次可检测样品数多,操作简便,快速等特点.

但假阳性率较高.

杨兴武等8】应用酶联免疫吸附法检测猪尿液中盐酸克仑特罗残留.

结果表明,盐酸克仑特罗的线性范围为200～2000ng/kg,最小检出限为

100n~L,样品不用前处理可直接检测,1个样品的2个平行样测定时间

为45min.该方法回收率在81.9%～106.8%之间,相对标准偏差(RSD)d~

于9%.李平等(采用直接竞争酶联免疫吸附试验对动物组织中的盐酸

克伦特罗残留量进行了快速检测.将CBL与蛋白质载体偶联制备了

CBL—BSA和HRP—CBL结合物,以CBL—BSA免疫实验兔获得特异性

抗体,并建立了CBL残留直接竞争EHSA检测方法及检测试剂盒.结

果表明,检测线性范围0.1～62.5ng/mL,检测低限为0.10ng/mL,尿,肝,

肉和饲料的加标回收率为60.3%～l15.O%;相对标准偏差fRSD1为

3.4%～7-2%.

4.毛细管电泳法(CE)

毛细管电泳法测定盐酸克伦特罗残留具有重复性好,操作相对简

单,所需样品数量少等特点.

高杨菲等峒毛细管电泳法同步分离检测肉制品中"瘦肉精"及其

替代物法,整个分离在12min内完成.以90mmol/L的柠檬酸三钠

(pH5.6)为电泳缓冲液,8kV分离电压,200nm检测波长,在25~C下可使

克伦特罗,沙丁胺醇,特布他林和莱克多巴胺达到分离,分离度分别为

1.90,2.73和2.17,回收率为92.4%～102.0%,相对标准偏差(RSD)Ib于

3.2%,结果令人满意.王伟宇等…采用小型化毛细管电泳一电化学检测

技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗及其替代品莱克多巴胺和沙丁

胺醇,以直径300~m的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为+0.95V,

在lOOmmol/L的硼酸盐运行缓冲液中,3种组分在7min内实现了分离.

被测物浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限

为1.20x10~-2.06x10-Tg/ml.该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲

料样品中3种B一兴奋剂的测定,是一种有效的食品安全分析检测方

法

5.其他方法

樊晓博等采用时间分辨荧光免疫分析建立了简便,快速,灵敏的

盐酸克伦特罗检测方法.以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被96孔微

孑L板作为固相抗体,Eu标记抗原与样品中的CBL竞争结合抗体,建

立直接竞争荧光免疫分析体系.实验表明:方法灵敏度为0.021xg/L,样

品回收率为91%～101%,与沙丁胺醇,莱克多巴胺等结构类似物的交叉

反应率均小于1%.方法灵敏度高,特异性强,且操作简单,完全可以满

足现有实际检测需求.曾文芳等【"3l建立了用离子色谱一电化学修饰方法

l钡0定盐酸克仑特罗.采用离子色谱分离,碳纳米管修饰电极,直流安培

检测,DionexAG9一HC保护柱(2mmx50mm),8mmol/L碳酸钠+1O%甲醇

为淋洗液测定盐酸克仑特罗.盐酸克仑特罗的检测限是0.0003mg/L;样

品测定的回收率分别为96%～103%.陈丽莉等【锻计了一种快速检测猪

肉中盐酸克伦特罗的流动注射一化学发光免疫分析方法.采用过氧化脲

作为luminol—CH~I20?Hz0z—HRP化学发光体系氧化剂,联苯硼酸作为

.--——

207...——

科技信息.职教与成教

增强剂,流动注射化学发光法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物.

在最优条件下,测定克伦特罗的线性范围0.05～9~zg/L(r=-0.9959),检出限

为0.021~L.该方法已经成功应用于猪肉中克伦特罗残留的检测.胡华

军噪用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe

核壳量子点,然后在N一羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe

核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti—CLBpAb)连接.CdTe/ZnSe—

Anti—CLBpAb偶联物能识别克伦特罗一BSA抗原(CLB—BSA).光谱分析

表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm.将

合成的CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物作为指示克伦特罗(CLB)分子

的荧光标记物,制备出一种用于检测CLB的免疫层析试纸条,其最低

检测量可达1Ixg/L.

现常用的盐酸克伦特罗的检测方法各有优缺点,研究更快速,高

效,检测限更低,操作简单,费用低廉的现场检测方法是今后的发展方

向.

参考文献

[1]吴银良,李晓薇,刘素英等.气相色谱一质谱法测定肝脏组织中

盐酸克伦特罗和盐酸菜克多巴胺[J]分析化学,2006,34(8):1083—1086

[2]胡明友,邵国建,郭和光.GC—MS测定肝脏中克伦特罗方法的

探讨[J]冲国卫生检验杂志,2010(8):1867—1868

[3]PeterBatioens",DirkCourtheyn,HuberF,eta1.GasChromato—

graphicTandemMassSpectrometricanalvsisofclenbuterolresiduesinfaeces

[j]JournalofChromatograF"hyA.1996,750(1—2):133—139

[4]吴庆洁,石朝辉,蔡江帆.高效液相色谱法同时测定畜禽组织中

4种抗生素及盐酸克伦特罗残留量[I].中国卫生检验杂志,2010(7):

1642—1644

[5]顾国平,王森,周亚莲等-固相萃取高效液相色谱法测定猪肉中

盐酸克伦特罗残留[1].浙江农业科学,2008(5):624—626

[6]刘志梅,陈永艳,杨秀敏等.中空纤维液相微萃取——高效液相

色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留[I]中国食品,2009,9(2):

171—175

[7]毛丽莎,刘红河,陈慧玲.液相色谱一质谱联用法测定猪肉组织

中3种B一激动剂[J].中国热带医学,2009,9(7):1356—1358

[8]杨兴武,刘振国,周蓉等应用ELISA检测肉猪尿液中盐酸克仑

特罗方法的研究lI1.黑龙江畜牧兽医,2003(5):9—10

[9]李平,潘荣生,周洪斌等.动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA

检测试剂盒的研制[J].免疫学杂志,2006,22(6):178—151

[10]高杨菲,许学书毛细管电泳同步分离检测"瘦肉精"及其替代

物[J].食品工业,2008(3):71—74

[11]王伟宇,张玉莲,邢晓平等.小型化毛细管电泳!电化学检测法

测定猪尿和猪饲料中的B一兴奋剂[J]色谱,2()O8,26(2):228—231

[12]樊晓博,杨金易,高秀杰等Eu标抗原盐酸克伦特罗的时间分

辨荧光免疫检测[1].食品科学,2010,31(20):307—310

[13]曾文芳,陈永欣,吴龙等l离子色谱电化学修饰法测定盐酸克仑

特罗I1}冲国卫生检验杂志,2007,17(8):1350—1352

[14]陈丽莉,章竹君,付爱华流动注射化学发光免疫分析检测猪肉

中的盐酸克伦特罗残留[1].分析实验室,2011,30(2):6-8

[15]胡华军,付涛,张明洲等.CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试

纸条检测克伦特罗的研究[T].分析化学,2010,38(12):1727—1731

护理学基础实跬教学新搽i刁

宝鸡职业技术学院医学分院高丽萍

[摘要]护理学基础是一门实践性很强的学科,也是护理专业一门重要学科,要使护生学好掌握好,我们必须改革传统的教学模

式,以多元化的教学方式授课,来提高护生的学习兴趣,能力,以适应医学护理事业的发展.

[关键词]护理学基础实践教学教学改革

护理学基础是护理专业课程的主干课程,是一门实践性应用性学

科,可使护生具备从事护理工作所必须的基本知识,基本技能,基本情感

的专业基础课.随着社会的发展,医学事业的不断创新,过去的护理医

学模式已不再满足于临床工作,这就要求护理教师在临床教学工作中,

必须改革传统的教学模式,提高护理教学质量,使大多数护生完成教学

目标,强化护生的动手实践能力,做到理论和实践的有机结合.因此,笔

者在教学方法上做一下尝试:

1,道德素质的培养

近代护理学创始人南丁格尔将护理的发展带进新纪元,并提出和

实践了护理者必备的职业道德和伦理准则.1973年国际护士节学会修

订的《护士伦理学国际法》中规定:护士的基本职责包括"增进健康,预

防疾病,恢复健康和减轻痛苦"四个方面.与此相适应,护理道德的实质

在于:珍视人的生命,尊重人的尊严和权利,为个人,为家庭,公众提供

高质量的健康服务.l】

现代医疗护理是一种医生,护士,患者之间帮助与被帮助的关系,

护士承担着各种各样的角色,是护理工作的直接参与者,工作中应协调

好各方面的关系,才能使医疗护理井然有序,提高质量.以促进人民的

健康为宗旨,视患者为亲人.因此,我们要帮助学生树立正确的人生观,

价值观,职业责任感和道德感,树立牢固的专业思想,养成精益求精,一

丝不苟的工作作风,有吃苦耐劳的奉献精神,热爱护理事业,以促进患

者的健康,视患者为亲人为宗旨,为护理事业奉献一生.

2,传统的教学模式

在护理学基础的实践教学过程中,传统的教学模式是课前准备一

教师示教一学生回复一学生练习一抽查考核.这些教学方法如果重复

一

二次,学生可能会认真耐心的学习,可长期用此教学方法会让学生厌

烦,甚至会觉得是一种填鸭式教学,以至于对本门学科毫无兴趣.如今

的护生不同以往的中专生,她们基础好,理解力强,这种单一的教学模

式根本无法满足她们的求知欲望.

3,改革措施

3.1提高教师的综合素质

"要想教给学生一滴水的知识,教师必须要有一桶水的知识",这是

我院一位老校长的话.为了满足护理事业的发展,教师在授课前坚持集

...——

208...——

体备课和学习,讨论护理理论及操作教学中可能出现的问题及教学改

进方法,在教育观念上将应试型转变为创新型,素质型教育观;为保证

课堂教学不与临床应用脱节,教师应轮流定期到临床实习,参与临床一

作;为了更新,提高知识,应定期在高等学府进行深造学习,来满足专业

的需求.

3.2教学方法改革

3.2.1应用多媒体教学法多媒体教学是一种较先进的辅助教学手

段.在《护理学基础》实践教学中应用多媒体技术,有着无可比拟的优

势,使实践教学更显生动,直观,精彩.开阔学生视野,诱发学生想象,提

高学习效率,增强教学效果.比如无菌技术操作,在教师示教正确方法

后应用多媒体教学再次演示,学生的印象更加深刻.

3.2.2运用情景设计,角色扮演开展师生互动式教学.在实践操

作中设置情景,让护生利用角色扮演进行操作练习.在病员运送法教学

中,教师扮演护士,学生扮演患者,进行轮椅运送,一人,二人,三人及四

人运送的搬运,示教结束后由学生互相角色扮演,效果相当好,学生兴

趣很浓.

3.2.3以案例形式进行授课通过训练使学生体会到为病人解决健

康问题不只是简单的操作,还需要与病人沟通,评估和研究病人病情,

取得病人的配合,解决病人的问题.在口腔护理实践教学中,首先给出

一

个有口腔感染的患者,让学生按护理程序进行评估(观察到患者有哪

些客观体征),计划(如何护理患者口腔,选择何种簌口液),实施(具体

护理措施),评价(口腔护理后感染是否消失或好转),通过此形式的授

课,学生会深入教学中,彻底吃透教学内容.

3.2.4增加临床见习临床见习在《护理学基础》教学中必不可少,

是弥补在校学习无法开展的实践,比如:洗胃法,在校实践教学只能模

拟性的操作讲授,尤其是下胃管,缺乏真实感,有时觉得像演戏,学生听

后似懂非懂.因此,临床见习提高学习效果.

3.2.5比赛式教学法此教学法不仅激发了学生学习的积极性和

趣味性,巩固了学生所学知识和技能,使学生以赛促学,达到增强记忆,

激发上进心,熟练掌握技能操作的目的,提高了心理素质及集体荣誉

感.铺床法在教学中要求学生快速,正确完成操作,以体现节力的原则.

从教十几年,每届学生铺床法都采用比赛式,深受学生的欢迎.

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